编号 zgly0001381476

文献类型 期刊论文

文献题名 茶尺蠖小RNA病毒全长cDNA克隆的构建

作者 林美娟  谢键  张珈敏  叶姗  胡远扬 

作者单位 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2010年07期

年份 2010 

分类号 S476.13 

关键词 茶尺蠖小RNA病毒  全长cDNA克隆  传染性软化病毒科  反向遗传学 

文摘内容 为了初步研究茶尺蠖小RNA病毒(Ectropis oblique picorna-like virus,EoPV)的复制机制,从被EoPV感染致死的茶尺蠖幼虫中分离并纯化病毒粒子,提取病毒RNA,根据已公布的EoPV核苷酸序列,利用基因组上单一的酶切位点,设计特异性引物,应用RT-PCR扩增出5个覆盖全长的片段。随后采用融合PCR将5个片段拼接,最终将全长定向克隆到低拷贝质粒载体上,成功构建cDNA全长克隆p-EoPV。双酶切及测序鉴定证明全长克隆构建成功。与原序列比较发现,该克隆在氨基酸水平上有8个突变和1个缺失。本研究为深入探讨EoPV病毒生物学特性、病毒复制机理等奠定了基础。