编号 zgly0001447808

文献类型 期刊论文

文献题名 草地贪夜蛾PP2A的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

作者 郝少东  杨宝东  王进忠  张志勇  张民照  郑林青  孙淑玲 

作者单位 农业应用新技术北京市重点实验室北京农学院植物科学技术学院 

母体文献 应用昆虫学报 

年卷期 2013年05期

年份 2013 

分类号 S433.4 

关键词 草地贪夜蛾  蛋白磷酸酶2A  分子克隆  原核表达 

文摘内容 为建立斑蝥素等PP2A抑制剂的体外活性测定方法,用于以杀虫剂为目的的药物快速活性评价,本研究首次同源克隆了鳞翅目昆虫草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda(J.E.Smith)的PP2A催化亚基cDNA全长序列,探索了该基因在大肠杆菌中的表达。结果显示,S.frugiperda的PP2A编码一条309个氨基酸的肽链,预测其蛋白质分子量为35.46 ku,等电点5.37。分析蛋白质氨基酸序列,没有发现信号肽和跨膜结构,推测该PP2A主要存在于胞质中。多重比对分析S.frugiperda及其它昆虫的PP2A,表明PP2A的保守性较高,可以用S.frugiperda PP2A作为研究斑蝥素等抑制剂的药物筛选靶标酶,用于杀虫剂的筛选。利用该基因构建pET30a-PP2A原核表达载体转化至E.coli BL21(DE3)中,在16~30℃,0.2~0.8 mmol/L的IPTG下均能成功诱导PP2A-His表达,经Ni-琼脂糖柱纯化后可以得到SDS-PAGE呈现单一条带的纯化蛋白,电泳纯度大于90%,为进一步活性测定奠定了基础。