编号 zgly0001205654

文献类型 期刊论文

文献题名 筛选家蚕分子标记的有效方法—SADF法

作者 何宁佳  鲁成  周泽扬  向仲怀 

作者单位 西南农业大学蚕桑丝绸学院农业部蚕桑学重点开放实验室!重庆400716 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 1999年02期

年份 1999 

分类号 S882 

关键词 家蚕  分子标记  选择性扩增 

文摘内容 从家蚕品种 Ｃ１０８ 和大造后部丝腺提取的基因组 Ｄ Ｎ Ａ 用 Ｐｓｔ Ⅰ酶解后与自行设计的人工接头相连，并用与人工接头序列相匹配的选择性引物进行选择性 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增（ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ａｍ ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ） 。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测显示，用 Ｓ Ａ Ｄ Ｆ 法在两品种中能检测到稳定的 Ｄ Ｎ Ａ 多态性片段，表明此方法可用于分子标记的筛选。经研究发现：当 Ｐ Ｃ Ｒ 反应体系中 Ｍｇ２ ＋ 为１５ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ，ｄ Ｎ Ｔ Ｐｓ 为２００μｍ ｏｌ／ Ｌ，引物为１μｍ ｏｌ／ Ｌ 时可得到较好的结果；在热循环过程中，以５６ ℃退火为宜；扩增反应对模板 Ｄ Ｎ Ａ 质的要求远胜于量。