编号 zgly0001545054

文献类型 期刊论文

文献题名 利用EMA-qPCR建立快速检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法

作者 周大祥  殷幼平  王中康  熊书 

作者单位 重庆三峡学院生命科学与工程学院  重庆大学生命科学学院重庆市基因功能与调控重点实验室  重庆三峡医药高等专科学?；∫窖Р?ensp;

母体文献 植物?；?ensp;

年卷期 2017年03期

年份 2017 

分类号 S436.634.12 

关键词 猕猴桃溃疡病菌  叠氮溴乙锭  实时荧光定量PCR  活菌检测 

文摘内容 利用叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合(EMA-qPCR),建立了一种有效快速检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法。以猕猴桃溃疡病菌ITS序列为检测靶标,菌体经EMA渗透处理,再进行qPCR特异性扩增。结果显示,qPCR检测灵敏度为2cfu;当EMA的浓度为2.0μg/mL时,能有效抑制1.0×10~7 cfu/mL经高温灭活的死菌的扩增,对活菌的扩增没有影响。当活菌数在1.0×10~1~1.0×10~5 cfu范围内,每个qPCR反应体系中活菌数与Ct值呈线性相关(R~2=0.988)。不同温度处理活菌菌悬液后用EMA-qPCR检测猕猴桃溃疡病菌的存活情况并与平板计数法进行比较,结果表明待检样品可在4℃和20℃短期保存。对疑似带病猕猴桃材料进行EMA-qPCR检测,结果表明能减少猕猴桃溃疡病菌PCR的假阳性结果。本研究建立的EMAqPCR方法是一种有效检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法,能有效避免PCR检测实际样品可能造成的假阳性结果。