编号 zgly0001459682

文献类型 期刊论文

文献题名 罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达

作者 邢爱佳  马小军  莫长明  潘丽梅  韦鹏霄  唐春风  唐其 

作者单位 广西大学农学院  中国医学科学院药用植物研究所  广西壮族自治区药用植物园  广西药用资源?；び胍糯牧贾氐闶笛槭?ensp;

母体文献 园艺学报 

年卷期 2013年06期

年份 2013 

分类号 S668.9 

关键词 罗汉果  葡萄糖基转移酶  RACE  原核表达  融合蛋白 

文摘内容 从罗汉果(Siraitia grosvenorii)转录组中获得一条与罗汉果甜苷Ⅴ生物合成相关的葡萄糖基转移酶(UDPG)的unigene片段,以罗汉果授粉后70d的果实RNA为模板,利用RACE和RT-PCR技术克隆UDPG全长基因,将克隆得到的SgUDPG1基因连接到原核表达载体pEASY-E1上,构建融合表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,重组蛋白纯化,SDS-PAGE检测表达产物以及Western-blotting和质谱鉴定蛋白产物。结果表明,获得了1条SgUDPG1,全长为1959bp,开放阅读框ORF为1365bp,编码1条454aa的肽链,理论分子量为51.2kD,等电点为5.39,具有植物中次生代谢产物糖基转移酶特有的保守结构域PSPG-boxmotif。SgUDPG1在授粉后50d和70d的果实中表达逐渐升高,是对照授粉后3d的5.16倍和13.12倍,与果实中甜苷Ⅴ含量呈相同趋势。此基因的ORF可以在大肠杆菌中表达,并且可以纯化出比理论分子量大5.3kD的融合蛋白,通过Western-blotting和质谱鉴定,确定该蛋白属于罗汉果葡萄糖基转移酶。