编号 zgly0001349415

文献类型 期刊论文

文献题名 猪瘟流行毒株E0蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

作者 李鹏  张彦明  张志  李晓成  王晶钰  张燕霞 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  中国动物卫生与流行病学中心 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2008年10期

年份 2008 

分类号 S854.43 

关键词 E0基因  原核表达  间接ELISA 

文摘内容 【目的】表达猪瘟?；ば钥乖璄0蛋白,用以建立猪瘟抗体检测方法,为进一步开发诊断试剂盒和研究E0蛋白的免疫学功能奠定基础?！痉椒ā拷砦烈岸局闒J237-E0基因插入原核表达载体pET32a中,以BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,将表达的重组蛋白通过His亲和层析柱进行纯化,以纯化的His-E0融合蛋白作为诊断抗原,通过探索抗原包被量和抗体血清稀释倍数,建立检测猪瘟E0抗体的ELISA方法?！窘峁砍晒寺×薈SFV E0基因,其核苷酸序列为687 bp,编码229个氨基酸。经His亲和层析柱纯化检测纯度为0.587 mg/mL;SDS-PAGE电泳结果显示,表达的E0蛋白分子质量约为50.3 ku,表达的重组蛋白为可溶性蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%;ELISA方阵确定的最佳抗原包被量为100 ng,血清稀释倍数为1∶30,建立的ELISA方法与IDEXX公司猪瘟病毒抗体检测试剂盒的阳性符合率为92.3%,阴性符合率为85.7%。【结论】建立的ELISA检测方法,不但为猪瘟抗体监测提供了一种比较实用的血清学监测手段,也为进一步开发猪瘟抗体检测试剂盒奠定了基础。