编号 zgly0001390487

文献类型 期刊论文

文献题名 香蕉果实转录因子MaWRKY1基因的原核表达和多克隆抗体制备

作者 洪克前  邝健飞  陆旺金  陈建业 

作者单位 华南农业大学园艺学院广东省果蔬保鲜重点实验室 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2010年12期

年份 2010 

分类号 S668.1 

关键词 香蕉  WRKY  转录因子  原核表达  多克隆抗体  耐冷性 

文摘内容 MaWRKY1是从香蕉果实中克隆出的一个转录因子基因。为进一步研究该基因的功能,制备了MaWRKY1多克隆抗体。选取MaWRKY1基因全长中N端第168~400个氨基酸之间的包括两个WRKYGQK保守域的cDNA序列,构建了原核表达载体pET-MaWRKY1,并转化到大肠杆菌BL21中诱导表达菌体蛋白。SDS-PAGE电泳检测结果表明,His-MaWRKY1融合蛋白成功获得了高效表达,分子量在26kD左右。His-MaWRKY1融合蛋白经过Ni-NTA琼脂糖凝胶树脂纯化,SDS-PAGE制备胶割胶富集,电洗脱法纯化后得到的纯化蛋白浓度达到0.5mg·mL-1。经对新西兰兔进行5次免疫,获得了多克隆抗血清,采用免疫吸附方法对抗血清进行了纯化。将纯化后的抗体通过间接酶联免疫(ELISA)和蛋白质印迹(Western blot)分析,表明所制备的抗体具有很好的效价,效价比为1︰160000,同时具有良好的灵敏度和特异性。进一步提取香蕉不同组织总蛋白,Westernblot检测显示,在分子量26kD左右处出现特异的蛋白质条带,证明所制备的抗体可以与香蕉WRKY蛋白特异性结合,并且低温可以诱导香蕉果实中MaWRKY1蛋白表达,暗示MaWRKY1蛋白表达可能与果实耐冷性有一定的关系。