编号 zgly0001361093

文献类型 期刊论文

文献题名 桑天牛成虫肠道细菌基因组DNA的提取及PCR反应体系优化

作者 袁秀洁  李会平  黄大庄  黄秋娴  苏筱雨  侯晓杰 

作者单位 河北农业大学 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2009年02期

年份 2009 

分类号 S476 

关键词 桑天牛  肠道细菌基因组DNA  PCR反应体系  正交组合  单因素 

文摘内容 为了建立一套适用于桑天牛肠道细菌多样性研究的PCR反应体系和程序,采用改良的十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法提取桑天牛成虫肠道细菌基因组DNA,通过L16(45)正交组合试验和单因素梯度试验对MgC l2、dNTP、随机引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA的浓度和退火温度、循环次数等影响PCR扩增的重要因素进行优化。试验结果表明,采用改良的CTAB方法提取的桑天牛成虫肠道细菌DNA质量较高,适宜于PCR扩增分析。25μLPCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为:10×Buffer 2.5μL,MgC l22.0 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,随机引物0.48μmol/L,TaqDNA聚合酶0.75 U,模板DNA 75 ng;退火温度60℃,循环次数30次。