编号 zgly0001645971

文献类型 期刊论文

文献题名 美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化

作者 李娜  李恩杰  王青华  王玉珠  张永安  段立清 

作者单位 内蒙古农业大学林学院  中国林业科学研究院森林生态环境与?；ぱ芯克?ensp;

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2018年05期

年份 2018 

分类号 S763.42 

关键词 美国白蛾核型多角体病毒  ORF72  载体构建  诱导表达  纯化 

文摘内容 [目的]根据Ikdea对Hycu NPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。[结果]重组质粒p GEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功。通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够与p GEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38. 2 k Da。优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1. 0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4 h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高。[结论]成功构建了p GEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础。