编号 zgly0001527550

文献类型 期刊论文

文献题名 毛果杨中链?；窤合成酶的克隆及酶学分析

作者 曹山  蒋璐瑶  李丽红  要笑云  张强  撖静宜  王莹  李慧  陆海 

作者单位 北京林业大学生物科学与技术学院 

母体文献 北京林业大学学报 

年卷期 2016年07期

年份 2016 

分类号 S792.11 

关键词 毛果杨  MACS  克隆  原核表达  酶学分析 

文摘内容 中链?；窤合成酶（MACS）属于腺苷酸合成酶超基因家族,催化中链脂肪酸与辅酶A结合形成相应的中链?；窤。本研究通过同源检索毛果杨基因组数据库中的4CL基因,克隆得到毛果杨Pt MACS1的基因序列（基因编号:zgly000est Extfgenesh4pg.c640066）。通过序列分析可知,Box I和Box II两个在4CL中保守的结构域在该蛋白中并不保守。将Pt MACS1与原核表达载体p ET-30a（+）构建融合表达载体Pt MACS1-p ET-30a（+）,转化大肠杆菌BL21（DE3）后诱导重组蛋白进行表达。镍柱纯化重组蛋白后进行酶学活性分析,研究结果表明该蛋白对中链脂肪酸己酸、壬酸、癸酸显示出明显活性:Kcat分别为（130±2.65）、（193±3.46）、（201±5.51）μmol/（min·mg）,以该蛋白的最适底物癸酸测得该蛋白的最适反应温度为37℃,最适反应p H为7.0。该结果表明,Pt MACS1属于毛果杨中链酰基辅酶A合成酶家族一员,为后续毛果杨腺苷酸合成酶超基因家族的鉴定及分类分析提供资料。